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+v"ǧ(-~Z ƥjȧv+bq 秊x?+jXq= ۍ6~<ӝ9iըky"http://www.qzpfhg.com/k/cailiao/" target="_blank" class="keylink">材料与方法
1.1 材料
自病参上分离病原菌，接种于PDA培养基上，25 ℃培养48～72 h后，作为供试菌株。
供试药剂：1 000 亿芽孢/g的枯草芽孢杆菌WP（德强生物股份有限公司）、16 000 IU/mg的苏云金杆菌WP（武汉天惠生物工程有限公司）、200亿活菌/g的EM菌肥WP（新乡市心连心生物制品有限公司）、3亿CFU/g的哈茨木霉菌WP（美国拜沃股份有限公司）、200亿活菌/g的嗜热性侧孢霉DP（鹤壁市百惠生物科技有限公司）；200亿活菌/g的解磷菌DP（鹤壁市百惠生物科技有限公司）。
1.2 试验方法
试验采用生长速率法[6]。将配制好的PDA培养基加入到150 mL 三角瓶中，每瓶100 mL，高压湿热灭菌。将枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、EM菌肥、哈茨木霉菌、嗜热性侧孢霉、解磷菌各配成5个不同的浓度（表1）。将不同浓度药液分别取10 mL加入到冷却至50～55 ℃的培养基中充分混匀，再将培养基等量倒至5个培养皿。以加入等体积无菌水的PDA平板作为空白对照。待培养基凝固后，用内径6 mm的打孔器均匀打取活化的病菌菌饼，用消毒镊子夹取菌丝块，菌丝面朝下分别接种于含有不同浓度药液和不含药液的PDA平板培养基中央，每个浓度5次重复。置于25 ℃恒温培养箱内培养5 d，用十字交叉法测量病原菌的菌落直径。抑菌率公式如下：
抑菌率=■×100%
根据公式计算不同药剂不同浓度对病菌的抑制率。数据分析时去掉最大值和最小值，然后进行分析。并建立毒力回归方程y=a+bx，计算出各药剂对病原菌的有效中浓度EC50，分析比较不同药剂对供试病菌菌丝生长速率的影响、毒力及其抑菌作用。
2 结果与分析
2.1 不同生物制剂对人参根腐病的抑制效果
由生长速率法测得结果（表2）表明，不同药剂对病菌生长的抑制效果存在显著差异，苏云金杆菌、枯草芽孢杆菌、哈茨木霉菌、EM菌肥、解磷菌、嗜热性侧孢霉的抑菌率分别为68.94%～83.29%、78.12%～82.12%、40.00%～49.18%、59.53%～66.35%、58.12%～70.35%、60.00%～70.59%，其中以苏云金杆菌和枯草芽孢杆菌效果最好，其抑菌率最高分别达到了83.29%和82.12%；其次是EM菌肥、解磷菌以及嗜热性侧孢霉，其抑菌率最高分别达到66.35%、70.35%、70.59%；而哈茨木霉菌抑菌效果最差，抑菌率最高仅49.18%。
方差分析结果表明，苏云金杆菌、枯草芽孢杆菌、解磷菌、嗜热性侧孢霉等生物制剂的不同浓度之间也存在显著差异，其中88 000 mg/L苏云金杆菌的抑菌效果最好，为83.29%；其次为5 000 mg/L枯草芽孢杆菌，其抑菌效果达到82.12%；40 000 mg/L解磷菌及50 000 mg/L嗜热性侧孢霉也有较强的抑制效果，其抑菌率分别为70.35%、70.59%。
2.2 不同生物制剂对人参根腐病的EC50比较
不同生物制剂的毒力回归方程和EC50见表3。由表3可知，各供试生物制剂对人参根腐病菌的有效中浓度EC50存在一定差异，EC50越小，表明药剂的毒力越强，抑菌效果越好。在毒力回归方程中，斜率越大，表示抑菌效果越好。其中，枯草芽孢杆菌的抑菌效果最好，毒力最强，EC50最小，仅为0.17 mg/L；苏云金杆菌次之，EC50为707 mg/L，具有一定的抑菌效果。而EM 菌肥、解磷菌、嗜热性侧孢霉、哈茨木霉菌的EC50均在1 000 mg/L以上，说明这4种药剂对人参根腐病的抑制效果相对较差，毒力相对较弱。
3 小结与讨论
杀菌剂室内毒力测定中的EC50越小，说明病菌对药剂的反应灵敏度越高。试验结果表明，不同药剂对人参根腐病菌生长的抑制作用差异显著。抑菌效果由强至弱依次为枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、EM菌肥、解磷菌、嗜热性侧孢霉、哈茨木霉菌。其中以5 000 mg/L枯草芽孢杆菌的抑菌效果最好，抑菌率达到82.12%，EC50最小，为0.17 mg/L；其次是88 000 mg/L苏云金杆菌，抑菌率达83.29%，EC50为707 mg/L；EM菌肥、解磷菌、嗜热性侧孢霉、哈茨木霉菌抑菌效果较弱，抑菌率最高分别为66.35%、70.35%、70.59%、49.18%，EC50分别为1 148、3 630、 7 943、91 201 mg/L。从以上试验结果初步认为，枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、EM菌肥可作为生产上防治人参根腐病的推荐使用药剂。Lee等[7]研究表明，枯草芽孢杆菌B-4228对人参根腐病菌有较好抑制作用，与本试验结果一致。但本试验选用的解磷菌DP、嗜热性侧孢霉DP等药剂防治人参根腐病未见报道。这些药剂的发现，为人参根腐病的及时有效防治提供了理论依据与科学指导。
目前，生产上防治人参根腐病主要使用化学药剂，使用生物制剂防治人参根腐病很少。本试验通过生长速率法所得出的EC50仅是室内参考值，所筛选出的枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌2种生物制剂还需要进行田间小区试验，探讨用药时间和施药方法，以期获得最大的防治效果。
参考文献：
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[2] 杨淑贤，金 慧，陈 斌.人参现代化是吉林省中药现代化的重中之重[J].人参研究，2001，13（1）：2-7.
[3] 李 玉.农业植物病理学[M].长春：吉林科学技术出版社，1992.
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[5] 陈金堂，朱慧贞，李柏文.人参根腐病的药剂防治[J].中国医学科学院药物研究所，1980，1（9）：26-28.
[6] 慕立义.植物化学保护研究方法[M].北京：中国农业出版社，1994.79.
[7] LEE B D，PARK H.枯草杆菌B-4228对人参根腐病的抑制作用[J].人参研究，2005（4）：48.
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