对照品溶液的制备氯丙嗪标准储备液（104.1？g/mL）：精密称取0.01041g盐酸氯丙嗪对照品，置于100mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；氯丙嗪标准中间液（1.04？g/mL）：精密量取1.00mL氯丙嗪标准储备液于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；氯丙嗪标准使用液（104.1ng/mL）：精密量取2.00mL氯丙嗪标准中间液于20mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4方法学考察
3.4.1线性关系精密吸取氯丙嗪标准使用液500μL、1.00、2.50、5.00、10.00、50.00mL，分别置于100mL容量瓶中，用空白样品提取液稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.52～52.05ng/mL的氯丙嗪系列标准溶液，分别测定其峰面积。以氯丙嗪对照溶液浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=53813X+16752，R2=0.9996，说明氯丙嗪在0.52～52.05ng/mL范围内线性关系良好，如图1所示。
图1 盐酸氯丙嗪标准溶液曲线图
3.4.2精密度以10.41ng/mL的氯丙嗪标准溶液重复进样6次。测得平均峰面积为626000，RSD=1.1%，表明仪器精密度较高。
3.4.3回收率试验以不含氯丙嗪的空白猪肉为基质，以1.04、2.08、10.41μg/kg三个水平进行回收率试验，氯丙嗪的回收率在85.57%～95.97%之间（RSD=4.7%，n=6），表明本方法具有较高的回收率，准确度较好。
3.4.4重复性取6份不含氯丙嗪的猪肉样品，分别精密加入氯丙嗪标准使用液200μL，按样品溶液制备方法制备加标溶液，同批进行液质测定，测得氯丙嗪的平均峰面积为364000，RSD=2.7%，表明本方法重复性较好。
3.4.5检出限与定量限在阴性猪肉样品中添加一定量的氯丙嗪，按定量离子对色谱峰的信噪比等于3为检出限，信噪比等于10为定量限，得出方法检出限为0.15μg/kg，定量限为0.4μg/kg。
3.5实际样品的检测按本实验建立的方法，对市场上采购的不同猪肉样品进行测定，均未检出氯丙嗪。
4讨论
4.1 pH对萃取率的影响 针对国家标准GB/T 20763-2006中氯丙嗪回收率较低的情况，笔者分别对该方法中的萃取、反萃取、氮气浓缩等步骤进行试验，结果发现，萃取步骤中水相的pH是影响氯丙嗪萃取率的主要因素（其主要影响氯丙嗪的质子化，进而影响氯丙嗪的水溶性）。笔者对该步骤中水相的pH进行了考察。
所用水相为：pH分别为4、3、2、1的1mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（用盐酸调节pH）；浓度分别为0.2、0.5、1、2mol/L的盐酸。所用有机相为：10.41ng/mL的氯丙嗪甲基叔丁基醚溶液（精密量取1.00mL氯丙嗪标准中间液，置于100mL量瓶中，用甲基叔丁基醚稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照溶液）。
实验步骤为：将12mL有机相置于50mL聚丙烯离心管中，加入3mL不同pH的水相，振荡10min，离心10min。取上层溶液和对照溶液经0.22μm微孔滤膜过滤后进样，记录峰面积。对照溶液的峰面积以100%计，将不同水相pH条件下测得的氯丙嗪峰面积值与对照峰面积比较，可得出上层溶液中氯丙嗪的剩余量，进而计算出各水相pH条件下氯丙嗪的萃取率，如表1所示。本方法选择水相的pH值为-0.3，即采用2mol/L的盐酸。
4.2反萃取溶剂用量的选择 国标方法中氮气浓缩仪的使用增加了操作步骤，会在一定程度上造成氯丙嗪的损失，本实验用一定量的甲基叔丁基醚反萃取，经滤头过滤后直接进样，并对甲基叔丁基醚的用量进行了考察。
实验步骤如下：精密移取800μL氯丙嗪标准中间液，置于25mL量瓶中，用2mol/L的盐酸稀释至刻度，摇匀，即得氯丙嗪盐酸溶液。精密量取3.00mL氯丙嗪盐酸溶液（含盐酸氯丙嗪99.84ng）于50mL聚丙烯离心管中，加入1mL 11mol/L氢氧化钠溶液，摇匀。分别加入2、3、5、10mL甲基叔丁基醚，振荡15min，离心5min（4000rpm）。吸取上层溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤后进样，记录峰面积，计算不同体积甲基叔丁基醚反萃取的氯丙嗪的量和反萃取率。2、3、5、10mL甲基叔丁基醚对应的氯丙嗪反萃取率依次为72.34%、93.43%、72.52%和67.80%。因此，本方法选用3mL甲基叔丁基醚溶液对氯丙嗪进行反萃取。
目前，文献报道的猪肉中氯丙嗪残留量的测定方法较多，其中，能用于确证的主要有气质联用法[4-5]和液质联用法[6-8]，前者氯丙嗪的回收率不是太高[4]，或者用到了昂贵的内标物（D6-氯丙嗪）[5]，后者用到的仪器基本上为较高配置的超高效液相色谱-串联质谱[6-7]，普及性不高，张骏等采用的氯丙嗪的萃取与反萃取方法与国标方法基本一致[8]。
本方法采用的检测仪器为高效液相色谱-串联质谱，是目前应用较为广泛的检测手段。萃取步骤和反萃取步骤可净化提取液，且萃取率均较高，可不使用昂贵的内标物即可达到较高的回收率和较低的检出限，适用于猪肉中氯丙嗪残留量的检测。
参考文献：
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[3]鲁桂芳，滕青贤.氯丙嗪不良反应回顾性分析[J].中国医院用药评价与分析，2007，7（5）：388-390.
[4]许世富.猪肉中氯丙嗪GC/MS残留检测方法的研究[D].合肥：安徽农业大学，2008.
[5]单美娜，徐晓枫，蒲云霞，等.气相色谱质谱法测定猪肉中氯丙嗪残留[J].中国食品卫生杂志，2013，25（5）：438-440.
[6]齐士林，吴敏，严丽娟，等.超高效液相色谱-质谱对动物源食品中氯丙嗪、异丙嗪及其代谢物的测定[J].分析测试学报，2009，28（6）：677-681.
[7]孙雷，张骊，徐倩，等.超高效液相色谱-串联质谱法检测猪肉和猪肾中残留的10种镇静剂类药物[J].色谱，2010，28（1）：38-42.
[8]张骏，王硕，张燕，等.猪肉中多种兽药残留液质联用检测技术的研究[J].食品研究与开发，2014，35（6）：70-74，136.编辑/王敏
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