戊唑醇与丙森锌混用对苹果斑点落叶病菌的联合毒力测定及最佳配比筛选

材料与方法

1.1 供试靶标及培养条件

苹果斑点落叶病菌（Alternaria mali），主要是实验室分离之后进行储存，把冰箱4℃储存的病菌菌种转移到PDA培养基当中，并且在28℃的培养箱当中进行培养，保证其活性，通过2次转接之后进行备用。

1.2 试验药剂

戊唑醇原药（tebuconazole），含量97%（百农思达（山东）农用化学品有限公司提供）。

丙森锌原药（propineb），含量85%（百农思达（山东）农用化学品有限公司提供）。

药剂配制方法：取0.103g戊唑醇原药溶解于20g二甲基甲酰胺，加入0.1%的NP-10水溶液定容至1000mL，制成浓度为100mg/L的透明乳液。

丙森锌原药用行业标准推荐的方法不能配出试验所需剂量，所以采用以下方法配制。

将丙森锌配制成1%悬浮剂母液，配方是：原药1.176g，农乳500 1.00g，乳化剂1602 2.00g，黄原胶0.20g，去离子水95.62g，砂磨机研磨1h。

空白对照：乳化剂1602 2.00g，农乳500 1.00g，黄原胶0.20g，二甲基甲酰胺2.00g，用含0.1%的NP-10的水溶液定容至100mL当做空白比对。

1.3 试验处理

1.3.1 剂量设置

经过相应的预试明确各个药剂制约浓度范围之后，各个药剂要根据其成分的实际含量设置5个剂量，其剂量处理情况如下：

戊唑醇：0.01、0.05、0.5、2、10mg/L

丙森锌：50、100、200、400、600mg/L

[戊唑醇：丙森锌（1：1）]：0.1、0.5、1、5、50mg/L

[戊唑醇：丙森锌（1：2）]：0.1、0.5、2、10、50mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：4）]：0.1、0.5、5、10、50mg/L

[戊唑醇：丙森锌（1：6）]：0.1、1、2、10、100mg/L

[戊唑醇：丙森锌（1：8）]：0.5、1、5、10、100mg/L

空白对照：空白对照母液稀释10倍。

1.3.2 试验重复

每个浓度处理重复4次。

1.3.3 试验时间和次数

本试验于2018年12月21日用药1次。

2 试验方法

试验依据中华人民共和国农业行业标准（杀菌剂）NY/T 1156.2-2006、NY/T 1156.6-2006进行。该试验主要使用菌丝生长方法明确药剂是否可以限制苹果出现斑点落叶，并且制约病毒的活性，其步骤如下：通过转接火花之后的苹果病菌菌株使用PDA培养基进行培养，在其菌株成长到3/4的时候，使用内径是8mm的打孔器在边缘位置上进行打孔操作，之后的菌丝块当做是接种体。选择配置好的浓度是设计10倍的药液5mL以及45mL的PDA培养基进行混合，之后倒进4个培养皿当中，在其冷却之后支撑相应的平板，使用药剂空包比对和培养基之间进行混合，然后进行对照，把经过接种的菌丝块放入到平板的中间位置，然后放进28℃的培养箱当中进行培养。

3 数据统计分析

3.1 调查方法

在空白对照的相应培养皿当中，在其菌丝成长到2/3的时候，要及时调整菌丝的实际生长情况，使用直尺对其菌落直径进行测量工作，其单位主要使用mm，各个菌落使用十字交叉方法测量其直径，之后选择器平均数值。

3.2 调查时间和次数

在2018年12月26日的时候进行调查。

3.3 计算方法

依照实际调查结果，根据下面的共识对菌丝生长抑制率进行计算，其单位主要是%，而计算结果应保留到小数点的后2位数值。

净生长量（mm）=测量菌落直径-8

菌生抑制率（%）=照生量-理生量照生量×100

3.4 统计分析

使用DPS软件依照药剂的实际浓度回归分析菌丝的生长抑制率，计算各个药剂的EC50值、EC90值、95%置信限和相应的b值、标准误（SD）。

SR=EC50（理值）EC50（察值）

EC50（理值）=a+baA的EC50+bB的EC50

其中：a、b分别为戊唑醇和丙森锌在组合中的百分含量

A为戊唑醇；B为丙森锌

依照Wadley方法对两个药剂经过配比之后的联合增效比值（SR）进行对比，SR<0.5代表具备拮抗作用，0.5≤SR≤1.5代表具备相加作用，SR>1.5代表具备增效作用。

4 结果与分析

试验结果表明：空白对照盘内菌丝扩展至培养皿的2/3时，与清水对照盘内处理相比，菌丝生长无明显差异，说明本配方筛选试验为有效试验。

戊唑醇、丙森锌及戊唑醇与丙森锌的各个占比混配情况对苹果病菌生长抑制率的结果如下表1，每个药剂的EC50值、EC90值及95%置信限和相应的b值、标准误差（SD）见表1。

由表1可知，戊唑醇、丙森锌对苹果斑点落叶病菌的EC50分别为0.28mg/L和195.73mg/L。戊唑醇、丙森锌对苹果斑点落叶病菌的EC90分别为54.61mg/L和1283.25mg/L。戊唑醇与丙森锌配比1：1、1：2、1：4、1：6、1：8的增效比值分别为1.08、1.24、1.90、1.68和1.41，双方使用1：4以及1：6的混配方法展现出相应的增效作用，且以1：4时增效比值最大，其增效机理、作用方式及田间药效尚待进一步验证。

戊唑醇为三唑类内吸性杀菌剂，具有保护、治疗和铲除作用，是真菌麦角甾醇生物合成抑制剂，用于防治多种植物的各种高等真菌病害，现已经登记用于苹果斑点落叶病防治。丙森锌是一种速效、长残留的重要杀菌剂。其所具备的杀菌机制并不明确与特定，可以使用的位置比较多，主要用来制约病原菌当中的丙酮酸氧化现象，对作物真菌引起的多种病害具有很好的防治效果。本试验结果表明，戊唑醇对苹果斑点落叶病菌的毒力要高于丙森锌，但戊唑醇對病原菌作用位点单一，容易产生抗药性。因此将内吸性与保护性杀菌剂混合使用，可有效延缓病原菌抗药性的产生，减少用药量，降低用药成本，是药剂开发的一个重要途径。

参考文献

[1] 马银蕊.苹果斑点落叶病的发生与防治[J].河北林业科技，2006（1）：29-30.

[2] 中国标准出版社总编室.中国国家标准汇编·6 （2003年修订）[M].中国标准出版社，2005.

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